تکنیک های کشت سلول از صفر تا صد
این بخش حاوی پروتکل ها و نکات مهم کشت سلولی شامل پاساژ سلولی (واکشت)، ذوب سلولی، انجماد سلولی، روش تریپسینه کردن سلول ها و شمارش سلولی می باشد.
کشت مجدد رده های سلولی جانوری / پاساژ سلولی / واکشت
در بخش سلولی مجموعه آزمایشگاه های سنجش و پایش کیاژن فارما، جهت پاساژ سلولی (subculture) جانوری و انسانی مراحل زیر انجام می شود:
- محیط کشت روی سلول ها دور ریخته و سلول ها 2 بار، هر مرتبه با 2 میلی لیتر PBS استریل شستشو خواهند شد.
- 1 میلی لیتر از محلول تریپسین (trypsin) به فلاسک کشت سلول اضافه و داخل انکوباتور 37 درجه سانتی گراد به مدت 5 دقیقه قرار خواهد گرفت.
- پس از کنده شدن یاخته ها از کف فلاسک، تریپسین (trypsin) با اضافه کردن 1 میلی لیتر محیط کشت سلولی کامل و حاوی سرم، خنثی خواهد شد.
- سوسپانسیون سلولی (cell suspension) به فالکن 15 میلی لیتری استریل منتقل و در 200-300 g به مدت ۵ دقیقه سانتریفیوژ خواهد شد.
- جهت واکشت سلولی (subculture)، رسوب سلولی (pellet) ایجاد شده در 1 میلی لیتر محیط کشت سلولی کامل و جهت انجماد سلولی (freezing)، رسوب سلولی در 1 میلی لیتر محیط کشت انجماد سلولی سوسپانت خواهد شد.
- سپانسیون سلولی (cell suspension) شمارش و از نظر زنده مانی بررسی خواهد شد.
پاساژ سلولی | آماده سازی محلول تریپسین
جهت آماده سازی استوک تریپسین (trypsin)، 1 میلی لیتر از استوک 10X تریپسین، داخل 9 میلی لیتر از محیط کشت فاقد FBS رقیق خواهد شد.
# واکشت سلولی #انجماد و ذوب سلولی #ذوب و انجماد سلولی # سوسپانسیون سلولی # تریپسینه کردن سلولی #تیریپسینه کردن سلولی #فیریز سلولی #فریز سلولی #دیفریز سلولی #دفریز سلولی #پاساژ سلولی #ساب کاچر #subculture #cell freezing #cell thawing #cell culture #آزمایشگاه همکار سازمان ملی استاندارد #آزمایشگاه همکار سازمان غذا و دارو #آزمایشگاه همکار اداره کل تجهیزات پزشکی #آزمایشگاه سنجش و پایش کیاژن فارما # آزمایشگاه کیاژن فارما #آزمایشگاه کنترل کیفی کیاژن فارما #تعرفه آزمون های زیست سازگاری #قیمت آزمون های زیست سازگاری #قیمت آزمون های سم شناسی #تعرفه آزمون های سم شناسی #آزمون های کالای وارداتی #آزمون های کالای صادراتی #آزمون های تولیدات دارویی #همکار شرکت های دارویی #Kiagenpharma# Kiagen# اصلاح و نباتات #آزمون های تخصصی گمرکی #آزمون های گمرکی
تکنیک شمارش سلولی با لام نئوبار / هموسایتومتر
در بخش سلولی مجموعه آزمایشگاه های سنجش و پایش کیاژن فارما، جهت شمارش سلولی مراحل زیر انجام می شود:
- سوسپانسیون سلولی (cell suspension) پیپتاژ شده تا همگن شود.
- ۱۰ میکرولیتر از سوسپانسیون سلولی داخل ویال حاوی ۹۰ میکرولیتر از رنگ متیل گرین منتقل و پیپتاژ (resuspend) خواهد شد.
- لامل سنگی بر روی لام هموسایتومتر (hemocytometer / NeoBar lam) قرار گرفته و سوسپانسیون سلولی رقیق شده به یک نیمه از لام نئوبار منتقل خواهد شد.
- تعداد سلول های ۴ مربع 16 تایی اطراف لام به همراه ۲ ضلع خارجی هر مربع مطابق شکل زیر شمارش خواهد شد.
#subculture #;aj sg,g #ساب کالچر #شمارش سلولی #آزمایشگاه همکار سازمان ملی استاندارد #آزمایشگاه همکار سازمان غذا و دارو #آزمایشگاه همکار اداره کل تجهیزات پزشکی #آزمایشگاه سنجش و پایش کیاژن فارما # آزمایشگاه کیاژن فارما #آزمایشگاه کنترل کیفی کیاژن فارما #تعرفه آزمون های زیست سازگاری #قیمت آزمون های زیست سازگاری #قیمت آزمون های سم شناسی #تعرفه آزمون های سم شناسی #آزمون های کالای وارداتی #آزمون های کالای صادراتی #آزمون های تولیدات دارویی #همکار شرکت های دارویی #Kiagenpharma# Kiagen# اصلاح و نباتات #آزمون های تخصصی گمرکی #آزمون های گمرکی
تعداد سلول به ازای هر میلی لیتر محیط، بر اساس فرمول زیر محاسبه خواهد شد:
میانگین تعداد سلول ۴ خانه شمارش شده X فاکتور رقت (۱۰) X ۱۰۴ X درصد زنده مانی سلولی
#آزمایشگاه همکار سازمان ملی استاندارد #آزمایشگاه همکار سازمان غذا و دارو #آزمایشگاه همکار اداره کل تجهیزات پزشکی #آزمایشگاه سنجش و پایش کیاژن فارما # آزمایشگاه کیاژن فارما #آزمایشگاه کنترل کیفی کیاژن فارما #تعرفه آزمون های زیست سازگاری #قیمت آزمون های زیست سازگاری #قیمت آزمون های سم شناسی #تعرفه آزمون های سم شناسی #آزمون های کالای وارداتی #آزمون های کالای صادراتی #آزمون های تولیدات دارویی #همکار شرکت های دارویی #Kiagenpharma# Kiagen# اصلاح و نباتات #آزمون های تخصصی گمرکی #آزمون های گمرکی
تکنیک شمارش سلولی | درصد زنده مانی سلولی
- سوسپانسیون سلولی پیپتاژ (resuspend) شده تا همگن شود.
- 90 میکرولیتر از سوسپانسیون سلولی (cell suspension) داخل ویال حاوی 1۰ میکرولیتر رنگ تریپان بلو منتقل و پیپتاژ خواهد شد.
- سوسپانسیون سلولی رقیق شده به یک نیمه از لام هموسایتومتر / نئوبار منتقل خواهد شد.
- تعداد 100 عدد سلول به طور تصادفی شمارش خواهد شد.
- تعداد سلول های آبی رنگ از تعداد کل سلول های شمارش شده (۱۰۰) کم خواهد شد.
- عدد حاصل، درصد زنده مانی سلول ها می باشد.
#;aj sg,g # واکشت سلولی #انجماد و ذوب سلولی #ذوب و انجماد سلولی # سوسپانسیون سلولی # تریپسینه کردن سلولی #تیریپسینه کردن سلولی #فیریز سلولی #فریز سلولی #دیفریز سلولی #دفریز سلولی #پاساژ سلولی #ساب کاچر #subculture #cell freezing #cell thawing #cell culture #آزمایشگاه همکار سازمان ملی استاندارد #آزمایشگاه همکار سازمان غذا و دارو #آزمایشگاه همکار اداره کل تجهیزات پزشکی #آزمایشگاه سنجش و پایش کیاژن فارما # آزمایشگاه کیاژن فارما #آزمایشگاه کنترل کیفی کیاژن فارما #تعرفه آزمون های زیست سازگاری #قیمت آزمون های زیست سازگاری #قیمت آزمون های سم شناسی #تعرفه آزمون های سم شناسی #آزمون های کالای وارداتی #آزمون های کالای صادراتی #آزمون های تولیدات دارویی #همکار شرکت های دارویی #Kiagenpharma# Kiagen# اصلاح و نباتات #آزمون های تخصصی گمرکی #آزمون های گمرکی
پروتکل ذوب / دیفریز سلول | Cell Thawing Protocol
در بخش سلولی مجموعه آزمایشگاه های سنجش و پایش کیاژن فارما، جهت ذوب / دفریز سلولی (cell thawing) موارد زیر انجام خواهد شد:
- کرایوویال (cryotube) حاوی رده سلولی (cell line)، از تانک ازت خارج و سریعا داخل آب مقطر استریل ۳۷ درجه سانتیگراد قرار خواهد گرفت تا ذوب / دیفریز شود.
- درب ویال با الکل ۷۰ درصد ضدعفونی و سوسپانسیون سلولی (cell suspension) به فالکن استریل حاوی 5 میلی لیتر محیط کشت ذوب سلولی منتقل خواهد شد.
- فالکون به مدت ۱۰ دقیقه در (1000 RPM) 150-200 g، سانتریفیوژ خواهد شد.
- مایع رویی سول ها حذف و ۱ میلی لیتر از محیط کشت سلولی کامل، به رسوب (pellet) باقیمانده در ته فالکن اضافه و پیپتاژ خواهد شد.
آماده سازی محیط ذوب / دفریز سلولی | Thawing Frozen Cells
جهت آماده سازی محیط ذوب / دیفریز سلولی، ۱میلی لیتر FBS به 4 میلی لیتر محیط کشت DMEM اضافه خواهد شد.
#;aj sg,g #واکشت سلولی #انجماد و ذوب سلولی #ذوب و انجماد سلولی # سوسپانسیون سلولی # تریپسینه کردن سلولی #تیریپسینه کردن سلولی #فیریز سلولی #فریز سلولی #دیفریز سلولی #دفریز سلولی #پاساژ سلولی #ساب کاچر #subculture #cell freezing #cell thawing #cell culture #آزمایشگاه همکار سازمان ملی استاندارد #آزمایشگاه همکار سازمان غذا و دارو #آزمایشگاه همکار اداره کل تجهیزات پزشکی #آزمایشگاه سنجش و پایش کیاژن فارما # آزمایشگاه کیاژن فارما #آزمایشگاه کنترل کیفی کیاژن فارما #تعرفه آزمون های زیست سازگاری #قیمت آزمون های زیست سازگاری #قیمت آزمون های سم شناسی #تعرفه آزمون های سم شناسی #آزمون های کالای وارداتی #آزمون های کالای صادراتی #آزمون های تولیدات دارویی #همکار شرکت های دارویی #Kiagenpharma# Kiagen# اصلاح و نباتات #آزمون های تخصصی گمرکی #آزمون های گمرکی
پروتکل انجماد / فریز سلول | Cell Freezing Protocol
در بخش سلولی مجموعه آزمایشگاه های سنجش و پایش کیاژن فارما، جهت انجماد سلولی / فریز (cell freezing) موارد زیر انجام خواهد شد:
- زمانیکه لایه سلولی حدودا ۷۵ درصد کف فلاسک کشت سلولی را پر کرد (فاز لگاریتمی رشد سلولی)، سلول ها تریپسینه خواهد شد.
- سوسپانسیون سلولی (cell suspension) تا غلظت نهایی 107 cells/ml با محیط کشت انجماد سلولی (freezing medium)، رقیق خواهد شد.
- کرایوویال های ۲ میلی لیتری با ۱ میلی لیتر از سوسپانسیون سلولی (cell suspension) پر و ۲۴ ساعت داخل فریزر منفی ۷۰ درجه سانتی گراد قرار گرفته و سپس ویال ها به تانک ازت منتقل خواهد شد.
آماده سازی محیط انجماد سلولی | Freezing Cells
جهت آماده سازی محیط انجماد سلولی (freezing medium)، 0.5 میلی لیتر محلول DMSO و 1 میلی لیتر FBS به 3.5 میلی لیتر محیط کشت DMEM اضافه شود.
#;aj sg,g #واکشت سلولی #انجماد و ذوب سلولی #ذوب و انجماد سلولی # سوسپانسیون سلولی # تریپسینه کردن سلولی #تیریپسینه کردن سلولی #فیریز سلولی #فریز سلولی #دیفریز سلولی #دفریز سلولی #پاساژ سلولی #ساب کاچر #subculture #cell freezing #cell thawing #cell culture #آزمایشگاه همکار سازمان ملی استاندارد #آزمایشگاه همکار سازمان غذا و دارو #آزمایشگاه همکار اداره کل تجهیزات پزشکی #آزمایشگاه سنجش و پایش کیاژن فارما # آزمایشگاه کیاژن فارما #آزمایشگاه کنترل کیفی کیاژن فارما #تعرفه آزمون های زیست سازگاری #قیمت آزمون های زیست سازگاری #قیمت آزمون های سم شناسی #تعرفه آزمون های سم شناسی #آزمون های کالای وارداتی #آزمون های کالای صادراتی #آزمون های تولیدات دارویی #همکار شرکت های دارویی #Kiagenpharma# Kiagen# اصلاح و نباتات #آزمون های تخصصی گمرکی #آزمون های گمرکی
استاندارد های زیست سازگاری | References
ISO 10993-2: Biological Evaluation of Medical Devices – Animal welfare requirements.
ISO 10993-5: Biological Evaluation of Medical Devices – Tests for in vitro cytotoxicity.
ISO 10993-6: Biological Evaluation of Medical Devices – Tests for local effects after implantation.
ISO 10993-7: Biological Evaluation of Medical Devices – Ethylene oxide sterilization residuals.
ISO 10993-10: Biological Evaluation of Medical Devices – Tests for skin sensitization.
ISO 10993-11: Biological Evaluation of Medical Devices – Tests for systemic toxicity.
ISO 10993-12: Biological Evaluation of Medical Devices – Sample preparation and reference materials.
ISO 10993-22: Biological Evaluation of Medical Devices – Guidance on nanomaterials.
ISO 10993-23: Biological Evaluation of Medical Devices – Tests for irritation.
OECD Test No. 401: Guidelines for the Testing of Chemicals – Acute Oral Toxicity.
OECD Test No. 402: Guidelines for the Testing of Chemicals – Acute Dermal Toxicity.
OECD Test No. 403: Guidelines for the Testing of Chemicals – Acute Inhalation Toxicity.
OECD Test No. 404: Guidelines for the Testing of Chemicals – Acute Dermal Irritation/Corrosion.
OECD Test No. 405: Guidelines for the Testing of Chemicals – Acute Eye Irritation/Corrosion.
OECD Test No. 406: Guidelines for the Testing of Chemicals – Skin Sensitisation.
OECD Test No. 414: Guidelines for the Testing of Chemicals – Prenatal Developmental Toxicity Study.
OECD Test No. 416: Guidelines for the Testing of Chemicals – Two-Generation Reproduction Toxicity.
OECD Test No. 417: Guidelines for the Testing of Chemicals – Toxicokinetics.
OECD Test No. 424: Guidelines for the Testing of Chemicals – Neurotoxicity Study in Rodents.
OECD Test No. 426: Guidelines for the Testing of Chemicals – Developmental Neurotoxicity Study.
OECD Test No. 427: Guidelines for the Testing of Chemicals – Skin Absorption: In Vivo Method.
OECD Test No. 428: Guidelines for the Testing of Chemicals – Skin Absorption: In Vitro Method.
OECD Test No. 429: Guidelines for the Testing of Chemicals – Skin Sensitisation.
OECD Test No. 432: Guidelines for the Testing of Chemicals – In Vitro 3T3 NRU Phototoxicity Test.
OECD Test No. 440: Guidelines for the Testing of Chemicals – Uterotrophic Bioassay in Rodents.
OECD Test No. 441: Guidelines for the Testing of Chemicals – Hershberger Bioassay in Rats.
OECD Test No. 451: Guidelines for the Testing of Chemicals – Carcinogenicity Studies.
OECD Test No. 452: Guidelines for the Testing of Chemicals – Chronic Toxicity Studies.
OECD Test No. 456: Guidelines for the Testing of Chemicals – H295R Steroidogenesis Assay.
OECD Test No. 471: Guidelines for the Testing of Chemicals – Bacterial Reverse Mutation Test.
OECD Test No. 478: Guidelines for the Testing of Chemicals – Rodent Dominant Lethal Test.
OECD Test No. 484: Guidelines for the Testing of Chemicals – Genetic Toxicology: Mouse Spot Test.
OECD Test No. 489: Guidelines for the Testing of Chemicals – In Vivo Mammalian Alkaline Comet Assay.
# واکشت سلولی #انجماد و ذوب سلولی #ذوب و انجماد سلولی # سوسپانسیون سلولی # تریپسینه کردن سلولی #تیریپسینه کردن سلولی #فیریز سلولی #فریز سلولی #دیفریز سلولی #دفریز سلولی #پاساژ سلولی #ساب کاچر #subculture #cell freezing #cell thawing #cell culture #آزمایشگاه همکار سازمان ملی استاندارد #آزمایشگاه همکار سازمان غذا و دارو #آزمایشگاه همکار اداره کل تجهیزات پزشکی #آزمایشگاه سنجش و پایش کیاژن فارما # آزمایشگاه کیاژن فارما #آزمایشگاه کنترل کیفی کیاژن فارما #تعرفه آزمون های زیست سازگاری #قیمت آزمون های زیست سازگاری #قیمت آزمون های سم شناسی #تعرفه آزمون های سم شناسی #آزمون های کالای وارداتی #آزمون های کالای صادراتی #آزمون های تولیدات دارویی #همکار شرکت های دارویی #Kiagenpharma# Kiagen# اصلاح و نباتات #آزمون های تخصصی گمرکی #آزمون های گمرکی
مقالات مرتبط رو حتما ببینید
نظر شما برای ما با ارزشه
0 دیدگاه