آزمون سمیت سلولی | Cytotoxicity Test / MTT
آزمون سمیت سلولی | Cytotoxicity Test / Methyl Thiazolyl Tetrazolium Test (MTT)
آزمون سميت سلولي (cytotoxicity test / MTT)، با استفاده از تکنیک کشت سلول جهت برآوردن الزامات زیست سازگاری و ارزیابی ریسک خطرات سمیت (toxicological risk assessment) تجهیزات پزشکی (medical devices)، داروها (pharmaceuticals)، سم و آفت کش (pesticides)، محصولات آرایشی و بهداشتی (cosmetics)، مواد شیمیایی صنعتی (chemicals) و محصولات مصرفی (consumer products) بکار می رود. تست سمیت شناسی به روش MTT، در صنایع مراقبت های بهداشتی (health care industries) و داروسازی (pharmaceutical industries) بسیار رایج است.
در مجموعه آزمایشگاه های سنجش و پایش کیاژن فارما، تست سميت سلولي (cytotoxicity test / MTT)، بر اساس استاندارد ISO 10993-5 انجام می شود و هدف از آزمون، ارزیابی پتانسیل سمیت ماده یا عصاره در تماس با لاین سلولی L-929 می باشد.
#آزمون سمیت سلولی MTT#آزمون MTT#آزمون ام تی تی#آزمون سمیت شناسی به روش MTT#تست سمیت سلولی MTT#تست MTT#تست ام تی تی#تست سمیت شناسی به روش MTT#آزمایش سمیت سلولی MTT#آزمایش MTT#آزمایش ام تی تی#آزمایش سمیت شناسی به روش MTT#سنجش سمیت سلولی MTT#سنجش MTT#سنجش ام تی تی#سنجش سمیت شناسی به روش MTT# sldj sg,gd#تست سمیت سنجی mtt#آنالیز MTT# MTT tests#MTT assay
توضیحات محصول
#آزمون سمیت سلولی MTT#آزمون MTT#آزمون ام تی تی#آزمون سمیت شناسی به روش MTT#تست سمیت سلولی MTT#تست MTT#تست ام تی تی#تست سمیت شناسی به روش MTT#آزمایش سمیت سلولی MTT#آزمایش MTT#آزمایش ام تی تی#آزمایش سمیت شناسی به روش MTT#سنجش سمیت سلولی MTT#سنجش MTT#سنجش ام تی تی#سنجش سمیت شناسی به روش MTT# sldj sg,gd#تست سمیت سنجی mtt#آنالیز MTT# MTT tests#MTT assay#آزمایشگاه همکار سازمان ملی استاندارد #آزمایشگاه همکار سازمان غذا و دارو #آزمایشگاه همکار اداره کل تجهیزات پزشکی #آزمایشگاه سنجش و پایش کیاژن فارما # آزمایشگاه کیاژن فارما #آزمایشگاه کنترل کیفی کیاژن فارما #تعرفه آزمون های زیست سازگاری #قیمت آزمون های زیست سازگاری #قیمت آزمون های سم شناسی #تعرفه آزمون های سم شناسی #آزمون های کالای وارداتی #آزمون های کالای صادراتی #آزمون های تولیدات دارویی #همکار شرکت های دارویی #Kiagenpharma# Kiagen# اصلاح و نباتات #آزمون های تخصصی گمرکی #آزمون های گمرکی#cytotoxicity test
آزمون سمیت سلولی | Cytotoxicity Test / Methyl Thiazolyl Tetrazolium Test (MTT)
آزمون سميت سلولي (cytotoxicity test / MTT)، میزان زنده مانی (viability) و مهار رشد سلول های تحت تیمار با ماده آزمایشی را بررسی مي كند و جزء تستهای برون تنی (in vitro) ضروری جهت ارزیابی زیست سازگاری و خطرات سمیت محصولات پزشکی (medical devices) می باشد. تست سميت سلولي، جهت ارزیابی پتانسیل سمیت مواد و تجهیزات پزشکی، آفت کش، سم، محصولات آرایشی و بهداشتی و مواد شیمیایی صنعتی و مصرفی انجام می شود.
مواردیکه پیش از کشت سلول باید رعایت شود ؟!
- کلیه محلول ها، ظروف و وسایل مورد استفاده در کشت سلول باید استریل باشد، بدین منظور محیط کشت حاوی سرم و آنتی بیوتیک، محیط کشت ذوب و انجماد، محلول PBS و محلول MTT با فیلتر 0.2 میکرون فیلتر شوند.
- از ظروف کشت استریل و یکبار مصرف جهت کشت سلول استفاده شود.
- کلیه مواد مصرفی و وسایل عصاره گیری باید استریل باشد.
- لامپ UV اتاق کشت و هود لامینار، حداقل ۲۰ دقیقه قبل از شروع کار روشن شود.
- قبل از ورود به اتاق کشت اطمینان حاصل شود که لامپ UV خاموش باشد.
- از برخورد نور به محلول MTT و پلیت ۹۶ خانه پس از اضافه کردن DMSO جلوگیری شود.
آماده سازی محلول MTT
جهت آماده سازی محلول MTT، ابتدا پودر MTT داخل محیط کشت DMEM در غلظت 1mg/ml حل شده، سپس محلول از فیلتر ۰.۲ میکرومتر عبور داده و در مقادیر مشخص الیکوت و فریز خواهد شد.
آماده سازی محیط کشت کامل | Culture Medium
جهت آماده سازی محیط کشت کامل، 1.5 میلی لیتر FBS و 150 میکرولیتر از محلول آنتی بیوتیک پنی سیلین استرپتومایسین (100X) به 13.5 میلی لیتر محیط کشت DMEM اضافه خواهد شد. محیط کشت کامل نهایتا به مدت 2 هفته داخل یخچال قابل نگهداری می باشد.
#آزمون سمیت سلولی MTT#آزمون MTT#آزمون ام تی تی#آزمون سمیت شناسی به روش MTT#تست سمیت سلولی MTT#تست MTT#تست ام تی تی#تست سمیت شناسی به روش MTT#آزمایش سمیت سلولی MTT#آزمایش MTT#آزمایش ام تی تی#آزمایش سمیت شناسی به روش MTT#سنجش سمیت سلولی MTT#سنجش MTT#cytotoxicity test#سنجش ام تی تی#سنجش سمیت شناسی به روش MTT# sldj sg,gd#تست سمیت سنجی mtt#آنالیز MTT# MTT tests#MTT assay
آزمون سمیت سلولی MTT | کشت سلول
در بخش سلولی مجموعه آزمایشگاه های سنجش و پایش کیاژن فارما، تست MTT، بر اساس مراحل زیر انجام خواهد شد:
- استوک لاین سلولی L-929 از تانک ازت خارج، ذوب و به فلاسک T-25 حاوی ۵ میلی لیتر از محیط کشت کامل منتقل خواهد شد.
- فلاسک کشت داخل انکوباتور قرار گرفته و پس از ۲۴ ساعت، سلول ها از نظر چسبندگی به کف فلاسک بررسی خواهند شد.
- سلول ها به مدت ۴۸ تا ۷۲ ساعت و تا زمان رسیدن به ۷۵ درصد تراکم کشت خواهد شد.
- سلول ها، 2 تا 3 مرتبه واکشت و شمارش خواهند شد، بدین منظور سلول های کشت شده ابتدا تریپسینه و غلظت سلولی به 105 سلول به ازای هر میلی لیتر محیط کشت رسانده خواهد شد.
- خانه های یک پلیت 96 خانه با 100 میکرولیتر از سوسپانسیون سلولی (104 سلول به ازای هر خانه) پر شده و 100 میکرولیتر از محیط کشت کامل فاقد سلول به عنوان نمونه بلنک در خانه های کناری پلیت در نظر گرفته خواهد شد.
- سلول ها به مدت 24 ساعت داخل انکوباتور قرار گرفته تا یک لایه نیمه متراکم سلولی (half-confluent monolayer) تشکیل شود.
- محیط کشت سلولی حذف و به ازای هر خانه، 100 میکرولیتر از محیط کشت حاوی ۴ رقت 100، 50، 25 و 12.5 درصد از ماده آزمایشی یا عصاره استخراج شده از آن و نمونه های کنترل منفی و مثبت به خانه ها اضافه و سلول ها به مدت 24 ساعت انکوبه خواهد شد.
- پلیت ۹۶ خانه، زیر میکروسکوپ اینورت بررسی شده تا تغییرات مورفولوژیک و رشد سلول های کشت شده در گروه های کنترل و تیمار مشخص شود.
- محیط کشت حذف و 50 میکرولیتر از محلول MTT به هر خانه اضافه خواهد شد.
- پلیت به مدت 2 ساعت داخل انکوباتور قرار گرفته، سپس محلول MTT حذف و 100 میکرولیتر از DMSO به هر خانه اضافه خواهد شد.
- پلیت داخل الایزا ریدر قرار گرفته و جذب نوری آن در طول موج 570 نانو متر خوانش خواهد شد.
- تشکیل فورمازان در هر یک از خانه های در معرض با رقت های ماده آزمایشی، با خانه های حاوی نمونه کنترل منفی مقایسه شده و برای هر گروه درصد مهار رشد محاسبه خواهد شد. کاهش در تعداد سول های زنده مستقیما در ارتباط با میزان رنگ بنفش فورمازان (blue-violet formazan) ایجاد شده است.
- جهت محاسبه کاهش زنده مانی در گروه تیمار نسبت به گروه کنترل منفی از فرمول زیر استفاده خواهد شد:
#آزمون سمیت سلولی MTT#آزمون MTT#آزمون ام تی تی#آزمون سمیت شناسی به روش MTT#تست سمیت سلولی MTT#تست MTT#تست ام تی تی#تست سمیت شناسی به روش MTT#آزمایش سمیت سلولی MTT#آزمایش MTT#آزمایش ام تی تی#آزمایش سمیت شناسی به روش MTT#سنجش سمیت سلولی MTT#سنجش MTT#سنجش ام تی تی#سنجش سمیت شناسی به روش MTT# sldj sg,gd#تست سمیت سنجی mtt#آنالیز MTT# MTT tests#MTT assay#cytotoxicity test
OD570e: ارزش میانگین غلظت خوانش شده در گروه غلظت 100 درصد ماده آزمایشی
OD570b: ارزش میانگین غلظت خوانش شده در گروه کنترل منفی
- هرچه درصد زنده مانی کمتر باشد یعنی پتانسیل سمیت سلولی ماده آزمایشی بیشتر است.
- اگر درصد زنده مانی زیر 70 درصد باشد، ماده آزمایشی سمی در نظر گرفته خواهد شد.
- در گروه رقت 50 درصد، درصد زنده مانی باید برابر و یا بیشتر از گروه غلظت 100 درصد باشد، در غیر این صورت آزمایش تکرار خواهد شد.
#آزمون سمیت سلولی MTT#آزمون MTT#آزمون ام تی تی#آزمون سمیت شناسی به روش MTT#تست سمیت سلولی MTT#تست MTT#تست ام تی تی#تست سمیت شناسی به روش MTT#آزمایش سمیت سلولی MTT#آزمایش MTT#آزمایش ام تی تی#آزمایش سمیت شناسی به روش MTT#سنجش سمیت سلولی MTT#سنجش MTT#سنجش ام تی تی#سنجش سمیت شناسی به روش MTT# sldj sg,gd#تست سمیت سنجی mtt#آنالیز MTT# MTT tests#MTT assay
استاندارد های زیست سازگاری | References
ISO 10993-2: Biological Evaluation of Medical Devices – Animal welfare requirements.
ISO 10993-5: Biological Evaluation of Medical Devices – Tests for in vitro cytotoxicity.
ISO 10993-6: Biological Evaluation of Medical Devices – Tests for local effects after implantation.
ISO 10993-7: Biological Evaluation of Medical Devices – Ethylene oxide sterilization residuals.
ISO 10993-10: Biological Evaluation of Medical Devices – Tests for skin sensitization.
ISO 10993-11: Biological Evaluation of Medical Devices – Tests for systemic toxicity.
ISO 10993-12: Biological Evaluation of Medical Devices – Sample preparation and reference materials.
ISO 10993-22: Biological Evaluation of Medical Devices – Guidance on nanomaterials.
ISO 10993-23: Biological Evaluation of Medical Devices – Tests for irritation.
OECD Test No. 401: Guidelines for the Testing of Chemicals – Acute Oral Toxicity.
OECD Test No. 402: Guidelines for the Testing of Chemicals – Acute Dermal Toxicity.
OECD Test No. 403: Guidelines for the Testing of Chemicals – Acute Inhalation Toxicity.
OECD Test No. 404: Guidelines for the Testing of Chemicals – Acute Dermal Irritation/Corrosion.
OECD Test No. 405: Guidelines for the Testing of Chemicals – Acute Eye Irritation/Corrosion.
OECD Test No. 406: Guidelines for the Testing of Chemicals – Skin Sensitisation.
OECD Test No. 414: Guidelines for the Testing of Chemicals – Prenatal Developmental Toxicity Study.
OECD Test No. 416: Guidelines for the Testing of Chemicals – Two-Generation Reproduction Toxicity.
OECD Test No. 417: Guidelines for the Testing of Chemicals – Toxicokinetics.
OECD Test No. 424: Guidelines for the Testing of Chemicals – Neurotoxicity Study in Rodents.
OECD Test No. 426: Guidelines for the Testing of Chemicals – Developmental Neurotoxicity Study.
OECD Test No. 427: Guidelines for the Testing of Chemicals – Skin Absorption: In Vivo Method.
OECD Test No. 428: Guidelines for the Testing of Chemicals – Skin Absorption: In Vitro Method.
OECD Test No. 429: Guidelines for the Testing of Chemicals – Skin Sensitisation.
OECD Test No. 432: Guidelines for the Testing of Chemicals – In Vitro 3T3 NRU Phototoxicity Test.
OECD Test No. 440: Guidelines for the Testing of Chemicals – Uterotrophic Bioassay in Rodents.
OECD Test No. 441: Guidelines for the Testing of Chemicals – Hershberger Bioassay in Rats.
OECD Test No. 451: Guidelines for the Testing of Chemicals – Carcinogenicity Studies.
OECD Test No. 452: Guidelines for the Testing of Chemicals – Chronic Toxicity Studies.
OECD Test No. 456: Guidelines for the Testing of Chemicals – H295R Steroidogenesis Assay.
OECD Test No. 471: Guidelines for the Testing of Chemicals – Bacterial Reverse Mutation Test.
OECD Test No. 478: Guidelines for the Testing of Chemicals – Rodent Dominant Lethal Test.
OECD Test No. 484: Guidelines for the Testing of Chemicals – Genetic Toxicology: Mouse Spot Test.
OECD Test No. 489: Guidelines for the Testing of Chemicals – In Vivo Mammalian Alkaline Comet Assay.
دیدگاهها
هیچ دیدگاهی برای این خدمت نوشته نشده است.