آزمون حساسیت زایی سنجش غدد لمفاوی موش | Murine Local Lymph Node Assay (LLNA)
تست حساسیت زایی سنجش غدد لمفاوی موش | Murine Local Lymph Node Assay (LLNA)
تست حساسیتزایی پوستی با استفاده از يك مدل حیوانی مناسب جهت برآوردن الزامات زیست سازگاری و ارزیابی ریسک خطرات سمیت (toxicological risk assessment) تجهیزات پزشکی (medical devices)، داروها (pharmaceuticals)، سم و آفت کش (pesticides)، محصولات آرایشی و بهداشتی (cosmetics)، مواد شیمیایی صنعتی (chemicals) و محصولات مصرفی (consumer products) بکار می رود.
آزمایش حساسیت زایی پوستی در صنایع مراقبت های بهداشتی (health care industries) و تجهیزات پزشکی (medical devices) بسیار رایج است.
در مجموعه آزمایشگاه های سنجش و پایش کیاژن فارما، آزمون حساسیت زایی سنجش غدد لمفاوی موش (LLNA) بر اساس استاندارد ISO 10993-10 انجام می شود. این تکنیک، روش جایگزین تستهای حساسیت زایی GPMT و Buehler می باشد.
در بسیاری از کشور ها روش LLNA تنها روش مورد تایید جهت بررسی حساسیت زایی آفت کش های تک جزئی و چند جزئی است، زیرا هم حساسیت تست نسبت به سایر روش ها (GPMT و Buehler) که بیشتر ذهنی (subjective) و کیفی هستند، بیشتر است و هم در این روش الزامات اصول سه گانه اخلاق در پژوهش (3R ) رعایت خواهد شد. طول آزمون حساسیت زایی سنجش غدد لمفاوی موش (LLNA)، حدود یک هفته می باشد.
در مواردیکه هدف از تست، دستیابی به یافته های کمی است و یا به دلیل اهمیت ماده / وسیله / دستگاه پزشکی، یافته های دقیق حساسیت زایی مورد نیاز است، باید از روش سنجش غدد لنفاوی موضعی موش (LLNA) استفاده شود. بنابراین آزمون LLNA، بهترین روش جهت بررسی محصولات پزشکی، آرایشی و بهداشتی، دارو و زیست مواد می باشد، با این حال بدلیل لزوم استفاده از رادیوایزوتوپ ها (3H-methyl thymidine و 125I-iododeoxyuridine) در این تست، اجرای آن با محدودیت هایی روبرو است.
توضیحات محصول
#Hcl,k llna#Hcl,k pshsdj chdd ynn gkth,d l,a#آزمون حساسیت زایی غدد لمفاوی موضعی موش#murine local lymph node assay#آزمون حساسیت زایی غدد لنفاوی موضعی موش#آزمون حساسیت زایی LLNA#آزمون LLNA در موش#آزمون حساسیتزایی غدد لمفاوی موضعی موش#آزمون حساسیتزایی غدد لنفاوی موضعی موش#آزمون حساسیتزایی LLNA#آزمون LLNA در موش#آزمون حساسیتزایی غدد لمفاوی موضعی موش#آزمون حساسیتزایی غدد لنفاوی موضعی موش#آزمون حساسیتزایی LLNA
آزمون حساسیت زایی سنجش غدد لمفاوی موش | Murine Local Lymph Node Assay (LLNA)
هدف از آزمون حساسیت زایی سنجش غدد لمفاوی موش (LLNA)، ارزیابی پتانسیل آلرژی زایی (allergenic potential) و ظرفیت حساسیت زایی (sensitizing capacity) لوازم و تجهیزات پزشکی است که این واکنش با افزایش تکثیر لنفوسیت ها در غدد لمفاوی تخلیه کننده ناحیه گوش اندازه گیری می شود.
درماتیت آلرژیک تماسی (contact allergic dermatitis) یک پاسخ ایمنی بواسطه مواد شیمیایی خاص است که سبب القای ازدیاد حساسیت تاخیری (type IV) با مشارکت سلول های T سیستم ایمنی می شود.
آزمون حساسیت زایی سنجش غدد لمفاوی موش (LLNA)، دقیق ترین و معتبر ترین آزمون جهت شناسایی خواص ایمنیزایی، آلرژیزایی و حساسیتزایی پوستی مواد فعال دارویی می باشد. واکنش حساسیت زایی زمانی رخ می دهد که لنفوسیت ها، ماده را به عنوان یک عامل خارجی تشخیص داده و شروع به تقسیم و تکثیر می کنند.
تست LLNA معمولا با رویکرد پاسخ به دوز انجام می شود، با این حال در مورد محصولات نهایی (final products) و تجهیزات پزشکی (medical devices)، داده های مربوط به عصاره رقیق نشده جهت تفسیر نتایج استفاده می شود.
#jsj llna#jsj pshsdj chdd ynn glth,d l,a#تست حساسیت زایی غدد لمفاوی موضعی موش#murine local lymph node assay#تست حساسیت زایی غدد لنفاوی موضعی موش#تست حساسیت زایی LLNA#تست LLNA در موش#تست حساسیتزایی غدد لمفاوی موضعی موش#تست حساسیتزایی غدد لنفاوی موضعی موش#تست حساسیتزایی LLNA#آزمون LLNA در موش#تست حساسیتزایی غدد لمفاوی موضعی موش#تست حساسیتزایی غدد لنفاوی موضعی موش#تست حساسیتزایی LLNA#
روش کار
در مجموعه آزمایشگاه های سنجش و پایش کیاژن فارما، تست حساسیت زایی سنجش غدد لمفاوی موش (LLNA) بر روی موش آزمایشگاهی نژاد سوری (NMRI) طبق مراحل زیر انجام و غدد لمفاوی تخلیه کننده ناحیه گوش، از نظر تکثیر سلول های لمفاوی (lymphocyte proliferation) با استفاده از تیمیدین یا یوریدین نشاندار 3H-methyl thymidine و 125I-iododeoxyuridine بررسی و میزان تجزیه آن در دقیقه (DPM) اندازه گیری خواهد شد.
- دوزتراپی موضعی بر روی گوش (dorsum) حیوانات به مدت 3 روز متوالی انجام خواهد شد.
- رادیولیبل های 3H-methyl thymidine یا 125I-iododeoxyuridine به صورت داخل وریدی (intravenously) به حیوانات تزریق می شود.
- ۵ ساعت بعد، حیوانات بر اساس موازین اخلاقی معدوم و غدد لمفاوی ناحیه گوش برداشته خواهد شد.
- سوسپانسیون سلولی آماده و با استفاده از 5 % trichloroacetic acid (TCA) رسوب داده خواهد شد.
- رسوب حاصله داخل محلول scintillation حل شده و جهت 3H-counting با بتا کانتر (beta counter) و جهت 125I-counting با گاما کانتر (gamma counter) خوانش خواهد شد.
- سطح رادیواکتیویتی در سلول های لمفاوی به صورت CPM (میزان خوانش در دقیقه) توسط بتا کانتر و گاما کانتر گزارش خواهد شد.
- CPM به DPM (میزان تجزیه در دقیقه) تبدیل و میانگین و انحراف از استاندارد آن محاسبه و بک گراند از آن کم خواهد شد. در نهایت شاخص SI (Stimulation Index) با تقسیم CPM گروه تیمار به CPM بلنک محاسبه خواهد شد.
زمانیکه SI ≥ 3 شود یعنی افزایش ۳ برابری تعداد لمفوسیت ها در گروه تیمار نسبت به گروه کنترل، نمونه حساسیت زا (sensitizer) در نظر گرفته خواهد شد.
- علاوه بر ارزیابی وسعت تکثیر سلول های لمفاوی، افزایش ضخامت گوش، میزان قرمزی گوش بر اساس جدول زیر و تغییرات وزنی حیوانات نیز بررسی خواهد شد. اگر نمره سرخی گوش ≥ 3، افزایش ضخامت گوش ≥ 25% و کاهش وزن بدن حیوانات در طول آزمون > 5% بود، ماده آزمایشی حساسیت زا در نظر گرفته خواهد شد.
#Hclhda pshsdjchdd ynn gkth,d l,a@Hclhda llna#آزمایش حساسیت زایی غدد لمفاوی موضعی موش#murine local lymph node assay#آزمایش حساسیت زایی غدد لنفاوی موضعی موش#آزمایش حساسیت زایی LLNA#تست LLNA در موش#آزمایش حساسیتزایی غدد لمفاوی موضعی موش#آزمایش حساسیتزایی غدد لنفاوی موضعی موش#آزمایش حساسیتزایی LLNA#آزمون LLNA در موش#آزمایش حساسیتزایی غدد لمفاوی موضعی موش#آزمایش حساسیتزایی غدد لنفاوی موضعی موش#آزمایش حساسیتزایی LLNA#سنجش حساسیت زایی غدد لمفاوی موش#سنجش حساسیت زایی غدد لنفاوی موش#سنجش غدد لنفاوی موش#سنجش غدد لمفاوی موش
واکنش پوستی ( Reaction) | درجه (Grading Scale) |
---|---|
بدون سرخی (no erythema) | ۰ |
سرخی بسیار خفیف (very slight erythema) | ۱ |
سرخی واضح (well-defined erythema) | ۲ |
سرخی ملایم (moderate erythema) | ۳ |
سرخی شدید (severe erythema) تا تشکیل جوشگاه (eschar) | ۴ |
#Hcl,k llna#Hcl,k pshsdj chdd ynn gkth,d l,a#آزمون حساسیت زایی غدد لمفاوی موضعی موش#آزمون حساسیت زایی غدد لنفاوی موضعی موش#آزمون حساسیت زایی LLNA#آزمون LLNA در موش#آزمون حساسیتزایی غدد لمفاوی موضعی موش#آزمون حساسیتزایی غدد لنفاوی موضعی موش#آزمون حساسیتزایی LLNA#آزمون LLNA در موش#murine local lymph node assay#آزمون حساسیتزایی غدد لمفاوی موضعی موش#آزمون حساسیتزایی غدد لنفاوی موضعی موش#آزمون حساسیتزایی LLNA
آماده سازی ماده آزمایشی | Test Sample Preparation
در بخش آماده سازی نمونه آزمایشی مجموعه آزمایشگاه های سنجش و پایش کیاژن فارما، جهت انجام تست حساسیتزایی سنجش غدد لمفاوی موش (LLNA)، ماده آزمایشی به شکل محلول، سوسپانسیون و یا عصاره استخراج شده از آن استفاده می شود، بدین منظور حلال/حامل طوری انتخاب می شود که بیشترین حلالیت را برای ماده داشته باشد، با این حال نباید سبب اختلال در آزمون شود.
در بخش آماده سازی نمونه کیاژنفارما جهت آماده سازی ترکیبات غیرپلیمری، از حلال هایی نظیر Acetone:Olive Oil, N,N-Dimethylformamide, Methyl Ethyl Ketone, Propylene Glycol, Dimethyl Sulfoxide (DMSO) و جهت آماده سازی ترکیبات پلیمری از روش های تخصصی تر و با استفاده از حلال های اختصاصی n-Hexane و Cyclohexane:2-Propanol استفاده می شود.
#jsj llna#jsj pshsdj chdd ynn glth,d l,a#تست حساسیت زایی غدد لمفاوی موضعی موش#تست حساسیت زایی غدد لنفاوی موضعی موش#تست حساسیت زایی LLNA#تست LLNA در موش#تست حساسیتزایی غدد لمفاوی موضعی موش#تست حساسیتزایی غدد لنفاوی موضعی موش#تست حساسیتزایی LLNA#آزمون LLNA در موش#murine local lymph node assay#تست حساسیتزایی غدد لمفاوی موضعی موش#تست حساسیتزایی غدد لنفاوی موضعی موش#تست حساسیتزایی LLNA
استاندارد های زیست سازگاری | References
ISO 10993-2: Biological Evaluation of Medical Devices – Animal welfare requirements.
ISO 10993-5: Biological Evaluation of Medical Devices – Tests for in vitro cytotoxicity.
ISO 10993-6: Biological Evaluation of Medical Devices – Tests for local effects after implantation.
ISO 10993-7: Biological Evaluation of Medical Devices – Ethylene oxide sterilization residuals.
ISO 10993-10: Biological Evaluation of Medical Devices – Tests for skin sensitization.
ISO 10993-11: Biological Evaluation of Medical Devices – Tests for systemic toxicity.
ISO 10993-12: Biological Evaluation of Medical Devices – Sample preparation and reference materials.
ISO 10993-22: Biological Evaluation of Medical Devices – Guidance on nanomaterials.
ISO 10993-23: Biological Evaluation of Medical Devices – Tests for irritation.
OECD Test No. 401: Guidelines for the Testing of Chemicals – Acute Oral Toxicity.
OECD Test No. 402: Guidelines for the Testing of Chemicals – Acute Dermal Toxicity.
OECD Test No. 403: Guidelines for the Testing of Chemicals – Acute Inhalation Toxicity.
OECD Test No. 404: Guidelines for the Testing of Chemicals – Acute Dermal Irritation/Corrosion.
OECD Test No. 405: Guidelines for the Testing of Chemicals – Acute Eye Irritation/Corrosion.
OECD Test No. 406: Guidelines for the Testing of Chemicals – Skin Sensitisation.
OECD Test No. 414: Guidelines for the Testing of Chemicals – Prenatal Developmental Toxicity Study.
OECD Test No. 416: Guidelines for the Testing of Chemicals – Two-Generation Reproduction Toxicity.
OECD Test No. 417: Guidelines for the Testing of Chemicals – Toxicokinetics.
OECD Test No. 424: Guidelines for the Testing of Chemicals – Neurotoxicity Study in Rodents.
OECD Test No. 426: Guidelines for the Testing of Chemicals – Developmental Neurotoxicity Study.
OECD Test No. 427: Guidelines for the Testing of Chemicals – Skin Absorption: In Vivo Method.
OECD Test No. 428: Guidelines for the Testing of Chemicals – Skin Absorption: In Vitro Method.
OECD Test No. 429: Guidelines for the Testing of Chemicals – Skin Sensitisation.
OECD Test No. 432: Guidelines for the Testing of Chemicals – In Vitro 3T3 NRU Phototoxicity Test.
OECD Test No. 440: Guidelines for the Testing of Chemicals – Uterotrophic Bioassay in Rodents.
OECD Test No. 441: Guidelines for the Testing of Chemicals – Hershberger Bioassay in Rats.
OECD Test No. 451: Guidelines for the Testing of Chemicals – Carcinogenicity Studies.
OECD Test No. 452: Guidelines for the Testing of Chemicals – Chronic Toxicity Studies.
OECD Test No. 456: Guidelines for the Testing of Chemicals – H295R Steroidogenesis Assay.
OECD Test No. 471: Guidelines for the Testing of Chemicals – Bacterial Reverse Mutation Test.
OECD Test No. 478: Guidelines for the Testing of Chemicals – Rodent Dominant Lethal Test.
OECD Test No. 484: Guidelines for the Testing of Chemicals – Genetic Toxicology: Mouse Spot Test.
OECD Test No. 489: Guidelines for the Testing of Chemicals – In Vivo Mammalian Alkaline Comet Assay.
دیدگاهها
هیچ دیدگاهی برای این خدمت نوشته نشده است.